فرمت word : پایان نامه ارشد رشته زیست شناسی : بررسی باکتری سالمونلا تیفی در سالاد به وسیله روش LAMP-PCR

You are here: مقاله » زیست شناسی » فرمت word : پایان نامه ارشد رشته زیست شناسی : بررسی باکتری سالمونلا تیفی در سالاد به وسیله روش LAMP-PCR
Published on: یکشنبه - 31 ژانویه 2016
Categories: زیست شناسی Tags: LAMP , PCR , باکتری , تیفی , سالاد , سالمونلا , شناسی , وسیله

با عنوان : مطالعه باکتری سالمونلا تیفی در سالاد به وسیله روش LAMP-PCR

در ادامه مطلب می توانید تکه هایی از ابتدای این پایان نامه را بخوانید

و در صورت نیاز به متن کامل آن می توانید از لینک پرداخت و دانلود آنی برای خرید این پایان نامه اقدام نمائید.

دانشگاه آزاد اسلامی
واحد دامغان
دانشکده: علوم پایه، گروه زیست شناسی
پایان¬نامۀ کارشناسی ارشد (M.Sc)
گرایش: میکروبیولوژی
عنوان
مطالعه باکتری سالمونلا تیفی در سالاد به وسیله روش LAMP-PCR
استاد راهنما:
دكتر مجید مقبلی حسين آبادي
استاد مشاور:
دكتر هاتف آجوداني فر

برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده درج نمی گردد

تکه هایی از متن به عنوان نمونه : (ممکن می باشد هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود اما در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل می باشد)

عنوان صفحه

چکیدۀ فارسی …………………………………………………………………………………………………………………………….12

فصل اول: مقدمه (اهداف پژوهش) ………………………………………………………………………………………………….13

اهداف پژوهش در نگاه اجمالی………………………………………………………………………………………………………..16

فصل دوم: كليات (سابقه و پیشینۀ پژوهش)……………………………………………………………………………………..17

1-2- مشخصات جنس سالمونلا……………………………………………………………………………………………………18

1-1-2- تاريخچه………………………………………………………………………………………………………………………18

2-1-2- خواص شكلي…………………………………………………………………………………………………………….. 19

3-1-2- خواص بيوشيميايي………………………………………………………………………………………………………..19

4-1-2-مقاومت در برابر عوامل فيزيكي و شيمياي…………………………………………………………………………..20

5-1-2- خواص كشت…………………………………………………………………………………………………………………20

6-1-2 شرايط رشد سالمونلاها……………………………………………………………………………………………………..21

7-1-2- بقا سالمونلا……………………………………………………………………………………………………………………22

8-1-2- زيستگاه…………………………………………………………………………………………………………………………23

2-2- تاكسونومي…………………………………………………………………………………………………………………………23

1-2-2- سالمونلا تيفي…………………………………………………………………………………………………………………26

2-2-2- سالمونلا انتريتيديس………………………………………………………………………………………………………..26

3-2-2- سالمونلا كلراسوئيس……………………………………………………………………………………………………….27

4-2-2- سالمونلا پولوروم…………………………………………………………………………………………………………….28

5-2-2- سالمونلا گاليناروم…………………………………………………………………………………………………………..28

6-2-2- سالمونلا آريزونا……………………………………………………………………………………………………………..29

7-2-2- ساختمان آنتیژني………………………………………………………………………………………………………….31

8-2-2- طبقه بندي سالمونلا به مقصود اهداف اپيدميولوژيكي………………………………………………………….32

1-8-2-2- ارگانيسمهاي موجب عفونت در بشر ………………………………………………………………………..32

2-8-2-2- واريته هاي سرولوژيكي سازگار با ميزبان………………………………………………………………………32

3-8-2-2- واريته هاي سرولوژيكي ناسازگار…………………………………………………………………………………33

3-2- شاخصهاي بيماريزايي……………………………………………………………………………………………………..33

1-3-2- آنتيژنهاي سطحي………………………………………………………………………………………………………..33

2-3-2-تهاجم…………………………………………………………………………………………………………………………….33

3-3-2- اندوتوكسين انتروتوكسين سيتوتوكسين …………………………………………………………………………….34

4-2- بيماريزايي و مكانيسم آن……………………………………………………………………………………………………34

1-4-2- طریقه بيماريزايي……………………………………………………………………………………………………………35

2-4-2- ميزان شيوع سالمونلوز در بشر……………………………………………………………………………………….35

3-4-2- عفونتهای سالمونلایی در بشر……………………………………………………………………………………..36

1-3-4-2- تب تيفوئيد و تبهاي رودهاي……………………………………………………………………………………..36

2-3-4-2- سپتيسمي…………………………………………………………………………………………………………………37

3-3-4-2- گاستروانتريت…………………………………………………………………………………………………………….37

4-4-2- علائم باليني در بشر……………………………………………………………………………………………………..37

5-2- اپيدميولوژي……………………………………………………………………………………………………………………….38

6-2- روشهاي تشخيص…………………………………………………………………………………………………………….40

1-6-2- روشهاي فنوتيپي…………………………………………………………………………………………………………..41

1-1-6-2- بيوتايپينگ………………………………………………………………………………………………………………..41

2-1-6-2- سروتايپينگ……………………………………………………………………………………………………………….42

3-1-6-2- روشهاي ايمنولوژيك………………………………………………………………………………………………..42

1-3-1-6-2- الايزا…………………………………………………………………………………………………………………….43

2-3-1-6-2- IMS…………………………………………………………………………………………………………………..44

2-6-2- روشهاي ژنوتيپي………………………………………………………………………………………………………….44

1-2-6-2- روش واكنش زنجيره ايي پليمراز PCR)) …………………………………………………………………. 45

2-2-6-2- multiplex PCR……………………………………………………………………………………………………47

3-2-6-2- real-time PCR……………………………………………………………………………………………..47

4-2-6-2- روش تکثير هم دمای وابسته به حلقه LAMP………………………………………………………………48

1-4-2-6-2- پرايمرهاي LAMP………………………………………………………………………………………………..49

2-4-2-6-2- مكانيسم واكنش LAMP……………………………………………………………………………………….51

3-4-2-6-2- مشخصات روش LAMP………………………………………………………………………………………56

4-4-2-6-2- مواد لازم برای انجام واکنش LAMP………………………………………………………………………57

5-4-2-6-2- ارزيابي محصولات LAMP……………………………………………………………………………………60

6-4-2-6-2- مكانيسم تشكيل كدورت در واكنش LAMP…………………………………………………………….61

7-4-2-6-2- مزاياي روش LAMP…………………………………………………………………………………………….62

7-2 مطالعات آزمايشگاهي…………………………………………………………………………………………………………….63

1-7-2- مطالعه بر روي سويههاي سالمونلا به روش الايزا……………………………………………………………….63

2-7-2- مطالعه بر روي سويههاي سالمونلا به روش PCR………………………………………………………………65

3-7-2- مطالعه بر روي سويههاي سالمونلا به روش LAMP…………………………………………………………..70

فصل سوم (مواد و روش ها)…………………………………………………………………………………………………………75

1-3 وسایل مورد بهره گیری………………………………………………………………………………………………………………76

2-3- مواد مورد بهره گیری ………………………………………………………………………………………………………………77

3-3- رنگ آمیزی گرم………………………………………………………………………………………………………………..79

4-3- تستهاي بیوشیمیایی……………………………………………………………………………………………………………79

1-4-3- تست سيمون سيترات…………………………………………………………………………………………………….81

2-4-3- تست تریپل شوگر ایرون آگار(TSI) ………………………………………………………………………………81

3-4-3- تست SIM…………………………………………………………………………………………………………………82

4-4-3- تست اوره …………………………………………………………………………………………………………………..82

5-3- روش تهیۀ گلسیرول استوک از باکتری مورد نظر…………………………………………………………………..83

6-3- روش استخراج DNA ……………………………………………………………………………………………………..83

1-6-3- طرز تهیۀ محلولهای مورد نیاز برای استخراج DNA………………………………………………………..84

2-6-3- مراحل استخراج DNA …………………………………………………………………………………………………84

7-3- تعیین غلظت DNA با دستگاه اسپکتروفتومتر……………………………………………………………………….86

8-3- الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………………………..87

1-8-3- طرز تهیه ژل آگارز…………………………………………………………………………………………………………88

2-8-3- طرز تهیۀ بافر (1X)TBE……………………………………………………………………………………………….88

9-3- واکنش PCR ……………………………………………………………………………………………………………………89

1-9-3- اجزا واکنش PCR………………………………………………………………………………………………………….91

2-9-3- روش انجام واکنش PCR با آنزیم SmarTaq DNA Polymerase……………………………….93

10-3- واکنش LAMP………………………………………………………………………………………………………………94

1-10-3- روش انجام واکنشLAMP …………………………………………………………………………………………95

11-3- آلوده سازي سس مايونز با باكتري مورد نظر………………………………………………………………………..96

12-3- آلوده سازي سالاد سبزيجات با باكتري مورد نظر…………………………………………………………………..97

13-3- تهيه پورپليت و شمارش باكتريها………………………………………………………………………………………98

1-13-3 تهيه رقت……………………………………………………………………………………………………………………..98

2-14-3- کشت سطحی………………………………………………………………………………………………………………99

2-14-3- کشت پورپلیت…………………………………………………………………………………………………………….99

3-13-3 شمارش باكتريها…………………………………………………………………………………………………………..99

فصل چهارم (نتایج)……………………………………………………………………………………………………………………100

1-4- رنگ آميزي گرم از باكتري……………………………………………………………………………………………….101

2-4- نتایج کشت نمونه ها روي محیط اختصاصي shigella– salmonella agar………………………101

2-4- تستهاي بيوشيميايي……………………………………………………………………………………………………..102

1-3-4- تست اوره………………………………………………………………………………………………………………….102

2-3-4- تست سيمون سيترات…………………………………………………………………………………………………..103

3-3-4 تست TSI ……………………………………………………………………………………………………………………104

4-3-4 تست SIM……………………………………………………………………………………………………………………105

5-3-4 تست متيل رد ……………………………………………………………………………………………………………….106

4-4- استخراج DNA …………………………………………………………………………………………………………….107

5-4- PCR………………………………………………………………………………………………………………………………108

1-5-4- حد تشخيص PCR………………………………………………………………………………………………………109

6-4- LAMP ……………………………………………………………………………………………………………………….110

1-6-4 حد تشخيص LAMP………………………………………………………………………………………………….112

فصل پنجم (بحث)……………………………………………………………………………………………………………………113

نتيجهگيري………………………………………………………………………………………………………………………………..121

منابع و ماخذ……………………………………………………………………………………………………………………………..122

چكيده

سالمونلا باكتري گرم منفي، متحرك و باسيلي شكل می باشد كه خصوصيات عمومي خانواده انتروباكترياسه را دارا مي‌باشد. سالمونلا و سروتيپ‌هاي آن منبع مهم آلودگي غذاهاي انساني و عامل پاتوژن بسيار قوي و بيماريزا در بشرهاست. امروزه بيش از 2450 سروتيپ سالمونلا شناسايي شده می باشد كه برخي از اين سروتيپ‌ها عامل بيماري‌هايي از قبيل تب تيفوئيد و انتروكوليك در بشر مي‌باشند. بیماریهاي ناشی از این عامل یک معضل بزرگ بهداشتی در جهان به خصوص در کشورهاي در حال توسعه مانند کشور ما می باشد. پس تشخیص سریع، دقیق و به موقع آن براي جلوگیري از اپیدمی و عوارض مخرب این باکتري ضروري بهنظر ميرسد.

روشهاي مختلفي براي جداسازي باكتري سالمونلا از نمونه‌هاي محيطي هست كه شامل: روش‌هاي كشت سنتي و بيوشيميايي، سرولوژيكي و مولكولي (مانند PCR) می باشد. تمام این روشها به زمان طولانی، تعداد زیاد باکتري در نمونه اولیه، تجهیزات گرانقیمت آزمایشگاهی و به افراد متخصص در این زمینه نیاز دارند.

هدف از این مطالعه مطالعه کارایی روش جدید تشخیص مولکولی LAMP در تشخیص عامل عفونی سالمونلا تیفی میباشد. مطالعه نتایج در تشخیص مولکولی سالمونلاها نشان داد که روش LAMP روشي سريع، ارزان و اختصاصی می باشد و بهجاي دستگاههاي گرانقیمت PCR و برنامه چرخه حرارتی چند دمایی آن با بهره گیری از یک بلوك حرارتی بسیار ساده و ارزان و در یک دماي واحد 60 درجه سانتيگراد و همچنين نظاره کدورت حاصل از فرایند تکثیر ژنها در زمان كوتاهتري به تشخیص اختصاصی این باكتري سالمونلا پرداخت.

این روش می تواند جهت تشخیص مولکولی سریع، دقیق و ارزان با كاربرد گسترده در آزمایشگاههاي تشخیصی و بخصوص تشخیص عوامل عفونی در آزمایشگاههاي مناطق محروم و آزمايشگاههاي سيار مورد بهره گیری قرار گیرد.

واژه هاي کلیدي : سالمونلا، تشخیص مولکولی، PCR، LAMP

مقدمه

اعضاي جنس سالمونلا، باكتري گرم منفي، ميلهايي، بيهوازي اختياري و بدون اسپور هستند. از آنجا كه جايگاه اصلي و طبيعي اين باكتري‌ها روده بشر و حيوانات مي‌باشد اصطلاحاً آنها را باسيل‌هاي روده‌اي يا انتريك مي‌نامند. از لحاظ شرايط رشد اين ميكروارگانيسم‌ها باكتري‌هاي انعطاف‌پذيري بوده و به آساني با شرايط محيطي خود را متناسب مي‌كنند اين جنس از ميكروارگانيسم‌ها به حرارت حساس‌اند. در درجه حرارت‌هاي پائين امكان بقاي آنها بيشتر می باشد .(Connie & Manuselis, 2000)

اكثر سروتيپ‌هاي سالمونلا پاتوژن‌هاي بالقوه براي بشر و بسياري از حيوانات مي‌باشند. اين باكتري‌ها در دستگاه گوارش مهره‌داران اعم از پستانداران و پرندگان و خزندگان و ماهي‌ها سيطره پيدا كرده، بسته به سروتيپ، شرايط و عوامل متعدد ميزباني، بيماريهايي با نشانه‌هاي گوناگون و عوارض متفاوت ايجاد مي‌كنند .(Merchant & Pocker, 1983)مانند باكتريهاي رودهايي هستند كه موجب بيماري تب تيفوئيد(حصبه)، تب شبه حصبه و بيماريهاي ناشي از مواد غذائي در بشر ميگردند(Jay et al., 2005).

بيماريهاي ناشي از آلودگي مواد غذائي ناشي از سالمونلا را non typhoidal ناميدهاند. سالمونلا بهگونه گستردهايي در محيط زيست از قبيل آب، خاك و مدفوع حيوانات توزيع شده می باشد (Cidrp, 2009). باكتري معمولاً از طريق مدفوع بشر و يا دام دفع شده و باعث آلودگي آب و غذا و محيط مي‌گردد. مواد غذائي مانند گوشت، تخممرغ، مرغ، سس مايونز، سبزيجات و غيره ،از ناقلهاي اوليه عفونت سالمونلا به بشر هستند(Dolye & Beuchat, 2007)..

سالمونلاي غيرتيفوئيدي علت اصلي بيماريهاي ناشي از مواد غذائي در سراسر جهان می باشد. كه برآورد شده كه حدود 4/1 ميليون مورد در سال مورد عفونت غذائي سالمونلا قرار ميگيرند(Mead et al., 1999).

از اينرو شناخت و تشخيص به موقع سالمونلا از اهميت خاصي برخوردار می باشد. با ذكر تمامي اين موارد به نظر مي‌رسد تشخيص به موقع و كنترل باكتري از وظايف مهم آزمايشگاه‌هاي ميكروب‌شناسي می باشد. امروزه از 3 روش رايج به تشخيص باكتري مي‌پردازند:

ـ روش‌هاي كشت سنتي و آزمايشات بيوشيميايي.

ـ روش‌هاي سرولوژيكي.

ـ روش‌هاي مولكولي.

براي تشخيص بهره گیری از روشهاي سنتي مبتني بر محيط كشت قابل قبول می باشد ولي وقتگير می باشد و براي تاييد جواب نهايي چند روز بهطول ميانجامد .(Andrews & Hammack, 2007) علاوهبر اين، روشهاي ايمنولوژيك مانند الايزا وIMS نيز براي شناسائي سالمونلا توسه يافتهاند.

. (Mansfield & Forsythe, 2000 ; FAVRIN , 2001) با اينحال اختصايت كم و هزينههاي بالا، بهره گیری ازين روشها را محدود كرده می باشد. اخيرا روشهاي مولكولي مانند PCR و real time PCR بهگونه گسترده در شناسائي سالمونلا بهره گیری ميشوند كه روشهايي كارآمد و حساس هستند.

Krascsenicsova et al., 2008) ; Eriksson & Aspan, 2007).

با اينحال اين روشها نيازمند سيكل حرارتي اختصاصي و دستگاههاي گرانقيمتاند. ازاينرو نياز به يك روش دقيق، حساس، آسان و بهصرفهتر می باشد. در سال 200 يك گروه ژاپني يك روش تشخيص مولكولي به نام LAMP را معرفي كردند .(Notomi et al., 2000)از آن وقت روش LAMP به عنوان يك روش اختصاصي، حساس و سريع براي شناسائي پاتوژنهاي ناشي از مواد غذائي مورد بهره گیری می باشد. يك روش ساده، بدون نياز به سيكل حرارتي اختصاصي و دستگاههاي گرانقيمت و به آساني قابل اجرا می باشد(Hara-Kudo et al., 2005; Notomi et al., 2000).

هدف اين تحقيق شناسائي باكتري سالمونلا تيفي در سالاد سبزيجات و سس مايونز آلوده با بهره گیری از روش LAMP، بهعنوان روشي سريع، حساس و اختصاصي ميباشد.

اهداف پژوهش در نگاه اجمالی

طراحي و بهينهسازي روش LAMP بر اساس ژن تهاجمي invA سالمونلا تيفي
تعيين حد حساسيت روش PCR و LAMP به روي ژن تهاجمي invA سالمونلا تيفي
مقايسه دو روش PCR و LAM

مشخصات جنس سالمونلا

1-1-2- تاريخچه

در سال 1885 يك دامپزشك آمريكائي به نام دانيل المر سالمون براي اولين بار اين باكتري را از خوك جدا كرد وآن را باسيلوس كلراسوئيس[1] ناميد. در سال 1888 جرم ديگري توسط گارتنر از فردي كه در اثر گاستروانتريت ناشي از مصرف گوشت نپخته مرده بود جدا گردید و آنرا باسيلوس انتريتيديس ناميد كه بعداً سالمونلا انتريتيديس خوانده گردید. در سال 1900 خواص اين باكتري توسط فردي به نام لينير بهگونه رسمي تصويب گرديد. از آنجا كه اين ارگانيسم ها شبيه به باكتري هاي جدا شده توسط سالمون بودند، به همين جهت به افتخار كاشف اوليه اين باكتري سالمونلا[2] ناميدند(Roumagnac et al., 2006).

در فاصله بين سالهاي 1925ـ1900 بزرگترين رويداد در كشف سرولوژيكي آنتي‌ژن‌هاي سوماتيك و فلاژلا در مورد گروه سالمونلا بوسيله ليگنيرز انجام گردید. در سال 1926 تركيبات پادگني سالمونلا طبقه‌بندي گرديد و جدولي به نام جدول كافمن ـ وايت ايجاد گردید. در حال حاضر اين جدول داراي حدود 2500 سروتيپ می باشد (Bhatia & Nabb , 1980) .

سالمونلا بطور گسترده در طبيعت توزيع شده می باشد مانند آب آلوده، خاك حاوي مدفوع حيوانات و غيره. به طور عمده اين باكتريها در رودهي حيوانات ساكن می باشد و مخزن اصلي آلودگي مرغ، تخم مرغ، دام، حيوانات خانگي و خزندگان می باشد(Cidrp, 2009).

2-1-2- خواص شكلي

اعضاي جنس سالمونلا باكتريهاي ميلهاي شكل و اندازهي آن 5-2 ´5/1-7 /. ميكرون بوده می باشد.گرم منفي، بدون اسپور و متعلق به خانوادهي انتروباكترياسهاند (J. Antonio , 2009 ; Dolye & Beuchat, 2007) .. اكثر اعضاي اين جنس متحرك و با تاژهي پريتريشاند بهغیر از چند مورد استثناء مانند سالمونلا گاليناروم[3] و سالمونلا پولوروم[4] (et al., 2005 Hara-Kudo).

3-1-2- خواص بيوشيميايي

اعضاي اين جنس قادر به تخمير گلوكز بوده ولي از تخمير ساكارز و لاكتوز ناتوانند. بيشتر انواع سالمونلا ها گلوكز، مالتوز، مانيتول، دولسيتول، دكسترين و سوربيتول را تخمير مي كنند و اسيد و گاز به وجودمي آورند. اكثر سويهها H₂sرا از منبع سولفوري معدني توليد كرده و تولید H₂S یکی از واکنش هاي کلیدي در تشخیص سالمونلاها ميباشد. به استثنای سروتیپ تیفی[5] در بیشتر موارد جدا شده از گلوکز گاز ایجاد ميکنند. در سيترات به عنوان تنها منبع كربن رشد ميكنند اما بعضی از گونه ها مانند سالمونلاتیفی و سالمونلا پاراتیفی A سیترات منفی هستند Aksoy, 2004)). اين باكتري اكسيداز منفي و كاتالاز مثبت بوده. از توليدات اين باكتري ليزين در كربوكسيلات، سولفات هيدروژن وارنيتين مي‌باشد.

( Alcamo , 1997 ; Connie & Manuselis, 2000) .

از ديگر ويژگيهاي بيوشيميايي اين می باشد كه اكثر سالمونلاها عدم توليد اندول، عدم توليد آنزيم‌هاي اوره آز، ليپاز، دزاكسي ريبونوكلئاز، فنيل‌آلانين و تريپتوفان دآميناز، دكربوكسيلاسيون اسيدهاي آمينه ليزين، اورنيتين و آرژنين، واكنش مثبت در آزمايش متيل‌رد(MR) و واكنش منفي در آزمايش وژس ـ پروسكوئر (VP) مثبت مي‌باشد.( (Alcamo , 1997 ; Dolye & Beuchat , 2007.

4-1-2- مقاومت در برابر عوامل فيزيكي و شيميايي

اين باكتري روي محيط كشت ماهها زنده ميمانند. حرارت 60 درجه را 15 تا 20 دقيقه تحمل ميكنند، سالمونلاها مدت 13 ماه در لاشههاي آلوده نگهداري شده در يخچال، 120 روز درآب، 280 روز در خاك باغچه و مدت بسيار طولاني در شيرخشكهاي بدون چربي و موادغذايي داراي تخم مرغ زنده ميمانند. سالمونلاها نسبت به سرما مقاوم بوده و مدت3 ماه در برف و يخ زنده مانده واز اين طريق ميتوانند اپيدمي بهوجود آورند. كلرامنفيكل استرپتوميسين و بسياري از آنتي بيوتيك هاي وسيع الطيف بر آن موثرند پني سيلين بر آن كاملا بياثر می باشد. سالمونلاها همچنين نسبت به املاح صفراوي مقاومند وبه همين دليل از اين مواد نيز علاوه بر رنگها در تهيه محيط‌هاي غني‌كننده بهره گیری مي‌كنند Aksoy, 2004)).

5-1-2- خواص كشت

اعضاي اين جنس هوازي بيهوازي اختياري ميباشند. مزوفيل بوده و رشد بهينهي آن در دماي 37درجه می باشد.با اينحال برخي از سالمونلاهادر شرايط شديد زيست محيطي مانند درجه حرارت بالاي 54 درجه و سرماي 4-2 درجه را تحمل كنند. pH مناسب براي رشد آن 5/7-5/ 6 مي باشد اما pH حدود 9- 5/4 را مي تواند تحمل كند و اگر pH پائينتر از 4 برود باعث از بين رفتن ميكروارگانيسم ميگردد. pH بيشتر از 9 صرفا از رشد آن جلوگيري ميكند. غلظت نمك 3/ 5 % بالاتر عاملي در جهت جلوگيري از رشد و تكثير باکتری می باشد (Jay et al., 2005 ; Doyle.M, 2007).

اکثر سالمونلاها در روی آگار مغذی بعد از 24 ساعت پرگنه هایی به قطر 3-2 میلی متر و به رنگ سفید، خاکستری، مرطوب ،کروی، مسطح، برجسته و صاف ایجاد می کنند. اندازه و درجه کدورت پرگنه ها به نوع سروتیپ بستگی دارد. سالمونلاها در محیط های مایع نظیر آبگوشت مغذی و آب پپتونه رشد زیادی دارند Jay et al., 2005)).

انواع محيط‌هاي غني كننده مي‌توان به آبگوشت تتراتيونات آبگوشت سلنيت F، آبگوشت را پاپورت (حاوي كلريدمنيزيم و سبزمالاشيت) و آبگوشت سلنيت سيستين تصریح كرده معمولاً بعد از 24ـ18 ساعت از محيط‌هاي غني كننده روي محيط‌هاي انتخابي جامد كشت مي‌دهند. از محيط‌هاي انتخابي و تفريقي مي‌توان به محيط مك‌كانكي و محيط سالمونلا ـ شيگلا، محيط سبز درخشان، محيط آهن ليزين‌دار، محيط داكسي كلات سيترات يا محيط ليفسون(DCA)، محيط هكتوئن و محيط داكسي كلات ـ ليزين ـ گزيلور تصریح كرد. محيط بيسموت سولفات آگار، نيز به عنوان محيط انتخابي براي جداسازي سالمونلا مورد بهره گیری قرار مي‌گيرد چرا كه قدرت انتخابگري اين محيط بالاست. اين باكتري‌ها معمولاً كربوهيدرات را با توليد اسيد و گاز تخمير مي‌كنند.

. (D’ Aoust , 1991 ; D’ Aoust , 1998 ; Connie & Manuselis, 2000 ; Ferretti , 2001)

6-1-2 شرايط رشد سالمونلاها

سالمونلاها قادرند در محيط‌هاي ساده آزمايشگاهي رشد نمايند و از تركيبات ساده كربن‌دار به عنوان منبع كربن و انرژي و از تعداد زيادي از تركيبات ازت به عنوان منبع نيتروژن بهره گیری كنند (D’Aoust , 1998).

اكثر سالمونلاها پروتوتروف بوده و در ميحط حداقل نمك با يك منبع كربن مناسب و يا محيط حداقل آمونيوم ـ گلوكز توانايي رشد دارند .(Morse, 1988)اكثر سويه‌هاي سالمونلاتيفي جهت رشد احتياج به اسيد آمينه تريپتوفان دارند. رشد سالمونلاها در دامنه حرارتي 5 تا 47 درجه می باشد ولي دماي اپتيمم 37 درجه می باشد .(D’ Aoust , 1991)

بعضي از گونه‌هاي سالمونلا درجه حرارت‌هاي بالاتر از c ْ54 را نيز تحمل مي‌كنند و عده‌اي ديگر خواص سرما دوستي را بوسيله رشد كردن در c ْ4ـ2 از خود نشان دادند. دردرجه حرارت‌هاي پائين امكان رشد و بقاي سالمونلا بيشتر می باشد. گزارش شده كه سالمونلاها نسبت به خشكي حساسند از اينرو انتشار آنها از طريق گرد و غبار و ذرات خشك كمتر از آب و مواد غذايي مرطوب می باشد. بقاء سالمونلاها به گونه نسبي به درجه حرارت محيط وابسته می باشد .(Davis , 1996) به طوريكه در 55 درجه سانتي‌گراد در عرض يك ساعت و در 60 درجه در مدت 15 دقيقه نابود مي‌شوند.

پاستوريزاسيون شير باعث از بين رفتن سالمونلاها مي‌گردد. شير به مدت 3ـ2 ثانيه در 66 درجه سانتي‌گراد، تخم‌مرغ به مدت 10 دقيقه در 55 درجه سانتي‌گراد و گوشت به مدت 10ـ15 دقيقه در 65 درجه سانتي‌گراد معمولاً عاري از سالمونلاي زنده خواهند گردید .(Alcamo , 1997)

رشد سالمونلا بوسله منابع مختلف كربن و نيتروژن تنظيم مي‌گردد. اندازه باكتري و ميزان متوسط اجسام نوكلئوزيدي هر دو مستقيماً به ميزان رشد وابسته‌اند. حساسترين معرف تغيير در ميزان رشد، RNA ريبوزومي می باشد. به غیر از مواردي كه ميزان رشد بسيارپائين می باشد، ميزان ريبوزوم‌ها درهر ميلي‌گرم پروتئين‌ با ميزان رشد متناسب می باشد. به دنبال افزايش سنتز RNA به آرامي ميزان سنتز پروتئين و DNA نيز افزايش مي‌يابد. اين مسأله به دليل تأثیر تنظيمي RNA در سنتز تركيبات يافته‌اي می باشد. آب نمك با غلظت بيش از 10% اثر كشندگي روي باكتري سالمونلا دارد .(D’ Aoust , 1991 ; Quinn , 1994)

7-1-2- بقا سالمونلا

بقاي سالمونلاها در محيط تحت‌تأثير عوامل مختلفي می باشد. گزارش شده كه سالمونلا دابلين در زمستان حداقل به مدت 73 روز و در تابستان 119 روز در مدفوع زنده مي‌ماند. بنا به تحقيقات بقا سالمونلاتيفي موريوم در چراگاه و خاك و بسته حدود 200 روز تخمين زده شده می باشد(.(Connie & Manuselis , 2000

بقاء سالمونلاها به گونه نسبي به درجه حرارت محيط وابسته می باشد به طوري‌كه سالمونلاتيفي موريوم و سالمونلا كلراسيس در c ْ29 به ترتيب 4 و 9 روز و در c ْ60 به مدت 25 و 38 روز زنده مي‌مانند. مقاومت به حرارت در مورد سالمونلايي كه در يك محيط غني از مواد مغذي رشد مي‌كنند و يا در محيطي با a_w كم هستند بيشتر از آنهايي می باشد كه در يك محيط فقيرند. بررسي‌ها نشان داده كه اگر سالمونلا تيفي موريوم در معرض محيط اسيدي ملايم (6 – 5/5) قرار گيرد سلول تا pH > 5/4 را تحمل مي‌كند Foster , 1995)).

8-1-2- زيستگاه

سروتيپهاي جنس سالمونلا از مهمترين باكتريهاي ميلهاي گرم منفي، عامل التهاب هاي رودهاي حاصل از مواد غذائي می باشد كه با منشا انسانى و حيوانى پراكنش وسيعى در طبيعت دارند. زيستگاه اصلي سروتيپهاي سالمونلا، روده جانوراني همانند پرندگان، خزندگان، جانوران مزرعها ي و بشر ميباشد .ميتواند از ماهي و لاكپشت نيز بهگونه مستقيم انتقال يابد. انتشار این باکتری از حیوان به حیوان دیگر و بهره گیری از مواد غذایی دامی آلوده به سالمونلا توجیه کننده این مطلب می باشد که حیوانات به عنوان مخزن باکتری میباشند MIRZAIE,2010)).

اين ارگانيسمها از طريق مدفوع دفع شده و مىتوانند موجب آلوده شدن آبهاگردند. مصرف آبهاي آلوده و مواد غذايي آلوده شده توسط حشرات يا ديگر واسطهها بهوسيله بشر و ساير جانوران موجب تكرار چرخه آلودگى مىگردد. تكرار اين چرخه از طريق تبادلات بينالمللي فرآوردههاي جانوري و خوراك دام عامل عمده انتشار جهاني سالمونلوزيس می باشد .

تعداد صفحه :128

قیمت : چهارده هزار و هفتصد تومان

*******

—-

پشتیبانی سایت : ———- [email protected]

Comments are closed.